الفحوصات الجينية باستخدام
Allele-Specific Oligonucleotide
تُستخدم هذه التقنية السريعة وغير المكلفة والدقيقة لتشخيص مجموعة واسعة من الاضطرابات الوراثية التي تسببها الطفرات النقطية.
Allele-Specific Oligonucleotide
تُستخدم هذه التقنية السريعة وغير المكلفة والدقيقة لتشخيص مجموعة واسعة من الاضطرابات الوراثية التي تسببها الطفرات النقطية.
وعلى النقيض تماما من فحص RFLPs الذي يقتصر على الحالات التي تغير فيها الطفرة موقع Restriction site فإن ASOs تكشف عن التغييرات في نيوكليوتيدة مفردة Single-nucleotide والتي تسمى Single-nucleotide Polymorphisms (رمزها SNPs)
يعتبر جزيء ASO جزء قصير من الحمض النووي أحادي الجديلة ss-DNA مصمم للتهجين Hybridize مع أليل محدد مكمل Complementary specific allele في الجينوم.
في ظل الظروف المناسبة سوف تحدث عملية تهجين ASO فقط مع تسلسل الحمض النووي DNA المكمل له وليس مع التسلسلات الأخرى أو حتى تلك التي تختلف بمقدار ضئيل مثل نيوكليوتيدة واحدة.
يتوفر الاختبار الجيني باستخدام ASOs وتحليل PCR للكشف عن العديد من الاضطرابات لدى البالغين والأطفال حديثي الولادة وللفحص قبل الولادة.
ففي حالة فحص فقر الدم المنجلي، يتم استخراج الحمض النووي DNA إما من عينة دم الأم أو من الخلايا الجنينية التي تم الحصول عليها عن طريق Amniocentesis
ففي حالة فحص فقر الدم المنجلي، يتم استخراج الحمض النووي DNA إما من عينة دم الأم أو من الخلايا الجنينية التي تم الحصول عليها عن طريق Amniocentesis
ويتم تضخيم منطقة من جين غلوبين β-globin بواسطة (PCR).
ثم يتم رصد هذه الكمية الصغيرة من الحمض النووي المتضخم على شرائط Strips of DNA binding membrane ثم يتم تهجين كل شريط Strip مع جزيء ASO الذي تم تصنيعه ليشابه التسلسل ذي الصلة من جين الغلوبين سواء الطبيعي أو الذي يمتلك طفرة.
ثم يتم رصد هذه الكمية الصغيرة من الحمض النووي المتضخم على شرائط Strips of DNA binding membrane ثم يتم تهجين كل شريط Strip مع جزيء ASO الذي تم تصنيعه ليشابه التسلسل ذي الصلة من جين الغلوبين سواء الطبيعي أو الذي يمتلك طفرة.
يتم تعليم جزي ASO بجزيء إما Radioactive or Fluorescent للسماح بمشاهدة عملية تهجين جزيء ASO مع DNA على الغشاء.
على الرغم من أن فحص ASO فعال للغاية لكن يمكن أن تؤثر SNPs على ارتباط جزيء ASO Probe مما يؤدي إلى نتائج إيجابية كاذبة أو سلبية خاطئة قد لا تعكس وجود اضطرابًا وراثيا خاصة إذا لم يتم استخدام ظروف التهجين الدقيقة.
سأعطيكم مثالا:
فحص (ASO) لفقر الدم المنجلي:
النتائج التي سيتم ملاحظتها إذا تم تهجين Hybridization الحمض النووي للأنماط الجينية الثلاثة لجين β-globin من فقر الدم المنجلي مع جزيء ASO يستهدف وجود أليل جين فقر الدم المنجلي
Sickle-cell β-globin allele
فحص (ASO) لفقر الدم المنجلي:
النتائج التي سيتم ملاحظتها إذا تم تهجين Hybridization الحمض النووي للأنماط الجينية الثلاثة لجين β-globin من فقر الدم المنجلي مع جزيء ASO يستهدف وجود أليل جين فقر الدم المنجلي
Sickle-cell β-globin allele
1-إذا كان الشخص سليم AA genotype - لن يحدث تهجين No-hybridization
2-إذا كان الشخص متغاير الزيغوت AS genotype - سوف يحدث تهجين ضعيف Weak hybridization.
3-إذا كان الشخص مريض SS genotype - سوف يحدث تهجين قوي Strong hybridization.
2-إذا كان الشخص متغاير الزيغوت AS genotype - سوف يحدث تهجين ضعيف Weak hybridization.
3-إذا كان الشخص مريض SS genotype - سوف يحدث تهجين قوي Strong hybridization.
جاري تحميل الاقتراحات...