معلومة جديدة ومفيدة🧬
ماذا تعرف عن تقنية ال(PCR)؟
🔹هي تقنية تعمل على مضاعفة الحمض النووي خارج الخلية حيث يتم بناء نسخ جديدة من شريطي الحمض النووي بعد انفصال الشريطين عن بعضهما يتم قراءة الشريط الأصلي(Template)كلا على حده ثم يتم بناء شريط جديد مرادف (Complimentary)للشريط الأصلي
ماذا تعرف عن تقنية ال(PCR)؟
🔹هي تقنية تعمل على مضاعفة الحمض النووي خارج الخلية حيث يتم بناء نسخ جديدة من شريطي الحمض النووي بعد انفصال الشريطين عن بعضهما يتم قراءة الشريط الأصلي(Template)كلا على حده ثم يتم بناء شريط جديد مرادف (Complimentary)للشريط الأصلي
ومعنى مرادف أي أن القواعد النيتروجينية التي يتم إضافتها على الشريط الجديد تقبل تكوين روابط هيدروجينية مع القاعدة النيتروجينية المقابلة لها في الشريط الآخر، بمعنى Adenine مع Thymine و Cytosine مع Guanine 🧬✨
#معلومه_جديده_مفيده
#معلومه_جديده_مفيده
🔹ماهي المكوّنات المستخدمة في ال(PCR)؟
١-شريط الحمض النووي DNA template
وهو جزيء الحمض النووي المراد مضاعفته في التفاعل، حيث يتم رفع درجة حرارة التفاعل الى مايقارب ٩٥ درجة مئوية لتكسير الروابط الهيدروجينية التي تربط الشريطين ببعضهما وبالتالي يصبح لدينا شريطين منفصلين عن بعضها
١-شريط الحمض النووي DNA template
وهو جزيء الحمض النووي المراد مضاعفته في التفاعل، حيث يتم رفع درجة حرارة التفاعل الى مايقارب ٩٥ درجة مئوية لتكسير الروابط الهيدروجينية التي تربط الشريطين ببعضهما وبالتالي يصبح لدينا شريطين منفصلين عن بعضها
٢-الشريط الباديء Primers
عند درجة حرارة ~55C تعود القواعد النيتروجينية إلى الإرتباط مع المرادف لها في الشريط الآخر وأثناء حدوث ذلك، يتم أيضا التصاق البرايمرز مع جزء من ال(template) المرادف لتسلسل القواعد النيتروجينيه المصممة خصيصا لترتبط في المنطقه المراد الإرتباط بها
عند درجة حرارة ~55C تعود القواعد النيتروجينية إلى الإرتباط مع المرادف لها في الشريط الآخر وأثناء حدوث ذلك، يتم أيضا التصاق البرايمرز مع جزء من ال(template) المرادف لتسلسل القواعد النيتروجينيه المصممة خصيصا لترتبط في المنطقه المراد الإرتباط بها
بمعنى أن البرايمرز يتم تصميمها مسبقا لترادف تسلسل القواعد النيتروجينية في شريط الحمض النووي المراد مضاعفته. وتتراوح أطوال البرايمرز غالبا من ١٨-٣٠ قاعدة نيتروجينية bp 18- 30 (سوف نتطرق لاحقا لكيفية تصميم البرايمرز بصورة مثالية)
٣-القواعد النيتروجينية dNTPs
وهي عبارة عن قواعد نيتروجينية A-T-C-G منفصلة وتوجد داخل محلول ملحي مناسب بتركيزات معينة. وتستخدم لبناء شريط الحمض النووي الجديد
وهي عبارة عن قواعد نيتروجينية A-T-C-G منفصلة وتوجد داخل محلول ملحي مناسب بتركيزات معينة. وتستخدم لبناء شريط الحمض النووي الجديد
٤-انزيم البوليميريز DNA polymerase
يعمل هذا الانزيم على بناء الشريط الجديد ويتم ذلك بوضع القاعدة النيتروجينية المناسبة على الطرف الصحيح (3Prime end) من البرايمرز الملتصق في الشريط المراد مضاعفته
يعمل هذا الانزيم على بناء الشريط الجديد ويتم ذلك بوضع القاعدة النيتروجينية المناسبة على الطرف الصحيح (3Prime end) من البرايمرز الملتصق في الشريط المراد مضاعفته
٥-محلول التفاعل (buffer)
وهو مهم لتفعيل نشاط انزيم البوليميريز حتى يتمكن من أداء وظيفته بدقه وكفاءة عالية. ويتكون المحلول من درجة حموضة مناسبة وتركيزات معينة من بعض الأملاح مثل المغنيسيوم كلورايد والذي يلعب دورا هاما في نشاط البوليميريز ومدى دقة بناء الشريط الجديد
وهو مهم لتفعيل نشاط انزيم البوليميريز حتى يتمكن من أداء وظيفته بدقه وكفاءة عالية. ويتكون المحلول من درجة حموضة مناسبة وتركيزات معينة من بعض الأملاح مثل المغنيسيوم كلورايد والذي يلعب دورا هاما في نشاط البوليميريز ومدى دقة بناء الشريط الجديد
🔹ماهي آلية وخطوات التفاعل؟
١- Denaturation
رفع درجة الحرارة في جهاز Thermocycler والذي يحتوي على انبوب التفاعل الى درجة حرارة عالية (غالبا 95C) وذلك لتكسير الروابط الهيدروجينية بين الشريطين وبالتالي فصلهما عن بعض
١- Denaturation
رفع درجة الحرارة في جهاز Thermocycler والذي يحتوي على انبوب التفاعل الى درجة حرارة عالية (غالبا 95C) وذلك لتكسير الروابط الهيدروجينية بين الشريطين وبالتالي فصلهما عن بعض
٢-Annealing
خفض درجة الحرارة الى مايقارب 55C (يتم تحديدها حسب البرايمرز او مايسمى Tm) وفي هذه الخطوة يتم التصاق البرايمرز مع الجزء المرادف له في شريط الحمض النووي المراد مضاعفته
خفض درجة الحرارة الى مايقارب 55C (يتم تحديدها حسب البرايمرز او مايسمى Tm) وفي هذه الخطوة يتم التصاق البرايمرز مع الجزء المرادف له في شريط الحمض النووي المراد مضاعفته
٣-Elongation
رفع درجة الحرارة الى مايقارب 75C لتفعيل نشاط انزيم البوليميريز والذي يعمل على تحفيز التفاعل وبناء الشريط الجديد بالاتجاه من ٥ إلى ٣ (مامعنى هذا الاتجاه؟)
رفع درجة الحرارة الى مايقارب 75C لتفعيل نشاط انزيم البوليميريز والذي يعمل على تحفيز التفاعل وبناء الشريط الجديد بالاتجاه من ٥ إلى ٣ (مامعنى هذا الاتجاه؟)
واخيرا ✨
🔹يتم تكرار الخطوات الثلاثة أعلاه (دورة واحده) إلى مايقارب ٢٥ دروة (حسب طول الجزء المراد مضاعفته وسرعة الانزيم ورغبة الباحث)
🔹يتم مضاعفة أعداد نسخ الحمض النووي باستخدام المعادلة 2^n+1 حيث يمثل n عدد الدورات
🔹يتم تكرار الخطوات الثلاثة أعلاه (دورة واحده) إلى مايقارب ٢٥ دروة (حسب طول الجزء المراد مضاعفته وسرعة الانزيم ورغبة الباحث)
🔹يتم مضاعفة أعداد نسخ الحمض النووي باستخدام المعادلة 2^n+1 حيث يمثل n عدد الدورات
جاري تحميل الاقتراحات...