رتبها

سلسلة تغريدات و مقاطع مترجمة من المختبر مع شرح لتقنية تمرير“Passage” و زراعة الخلايا “Cells Culture”

ماذا يعني زراعة الخلايا؟
اي إزالة خلايا من حيوان أو نبات ونموها لاحقًا في بيئة اصطناعية ملائمة.
كيف يمكن الحصول عليها؟
يمكن الحصول عليها مفصولة بالوسائل الأنزيمية أو الميكانيكية قبل الزراعة.

ماهو انواع الخلايا القابلة للزراعة؟
-النوع الاولي “Primary cell culture “
ويمكن الحصول عليها مباشرة من الانسجة مباشرة.
- النوع الثانوي
“Secondary cell culture “
ويمكن الحصول عليها من خلال
-من خلال خلايا من النوع الاولي جيث تم زراعة فايروسات مسرطنة بها او تم معالجتها كيميائيًا

-يوجد عدة اختلافات بين النوع الاول والثاني من ضمنها النوع الاولي لديه عدد محدود من الانقسام عكس الثاني لماذا؟
لان النوع الاولي مع الانقسام يفقد جزء من التيلومير telomere في الحمض النووي DNA
-ايضا من الفروق ان النوع الاولي فرصة التلوث فيه اعلى بينما الثاني اقل
-بقية الفروقات ⬇️

في هذا المقطع، كان الحديث في البداية عن مراحل نمو الخلايا وهي اربعه لم يذكرها كلها وهي:
١- مرحلة lag: عدم انقسام الخلايا
٢- مرحلة اللوغارتيم: نمو الخلايا
٣-مرحلة Plateau: الثبات او الانخفاض الطفيف
٤- مرحلة الانخفاض
ايضًا تحدث عن أهمية تعقيم الادوات والـ Hood

يوجد طريقتين لزراعة الخلايا هما :
-النوع الاول خلايا Adherent
-النوع الثاني خلايا Suspension
ومن الفروقات التي بينهما النوع نحتاج الى انزيم لفصلها مثل التربسين بينما النوع الثاني لانحتاج، بقية الفروقات في الجدول المرفق

في هذا المقطع كان الحديث عن النوع الاول وهو خلايا Adherent، تمت ازالة الوسيط/ الميديا القديم المستهلك، باستخدام ماصة معقمه، واضاف محلول ملحي مع التأكد انه لايحتوي على المغنيسيوم ولا على الكالسيوم لانهما يمنعان عمل الكاشف

هنا تم استخدام المجهر لرؤية تحرر الخلايا، فإذا تم استخدم التربسين فستحتاج مثبط له، اما اذا استخدمت TrypLE فلا تحتاج الى ذلك، بعدها تم وضع الانابيب في جهاز الطارد المركزي والسرعة والوقت يختلفان باختلاف نوع الخلايا، من المفترض ان تجد حبة/كرة في اسفل الانبوب

هنا سيتم اخراج الوسيط/الميديا القديم والتخلص منه، وادخال وسيط للنمو اخر، مع عدم تخريب الحبة/الكرة التي في الاسفل، الان سيتم اخذ جزء من الخلايا لحسابها وسيتم اضافة Trypan الازرق، وستكون الخلايا الحية باللون الابيض او عديمة اللون بينما الخلايا التي باللون الازرق هي الخلايا الميتة

سيتم اضافة الوسيط/ الميديا بناء على كثافة Seeding للخلايا، وستقوم بتغطية القارورة الـ Flask بغطاء يحتوي على فتحتات تهوية لمنع عملية التلوث، ثم سيتم وضع القارورة في الحضّانة

هنا الحديث كان عن النوع الثاني اي
خلايا Suspension ، وسيكون العمل بمثل التعليمات التي تمت في النوع الاول،
ومن المفترض انك ستقوم بتغيير الوسيط/الميديا كل ثلاثة اسابيع بعد وضعها في جهاز الطارد المركزي، لازالة الخلايا الميتة

الان ماهي استخدامات زراعة الخلايا؟
-في البيولوجيا الجزئية والخلوية، لمعرفة التفاعل بين العدوى (فايروس، بكتيريا..الخ) والخلايا
-في علم الفايروسات واللقاحات
-تطوير الادوية واختبارها
-استخدامات الخلايا الجذعية
-في الهندسة الوراثية والعلاج الجيني

ماهي ابرز المشاكل التي قد تواجهك؟
المشكلة: عدم وجود خلايا بعد تخزين الخلايا من ثم تذويبها
السبب: تخزين خاطئ
الحلول: قم باذابة الخلايا تدريجيًا، استخدم سرعات منخفضة اثناء عملك على جهاز الطارد المركزي

مشلكة اخرى: بطئ في نمو الخلايا
الاسباب هنا كثيرة منها: خلل في الميديا /وسيط النمو، التمرير Passage كانت اعدادها كثيرة، تلوث من المايكوبلازما
بقية المشاكل والحلول المقترحة مرفقة على شكل جداول