18 تغريدة 258 قراءة Jun 12, 2021
سلم الحمض النووي ( DNA ladder ) هو محلول من جزيئات الحمض النووي ذات الأطوال المختلفة المستخدمة في agarose or acrylamide gel electrophoresis. والذي يُستخدم كمرجع لتقدير حجم جزيئات الحمض النووي غير المعروفة و المفصولة على أساس حركتها في المجال الكهربائي.
📍ثريد عن DNA ladder
🔺سلالم الحمض النووي عبارة عن جزيئات أساسية تستخدم بشكل روتيني في كل معمل يتعامل مع الحمض النووي.
🔺يُطلق على سلالم الحمض النووي ( DNA ladder )أيضًا علامات حجم الوزن الجزيئي(molecular-weight size markers) لأنها تساعد على تمييز أجزاء الحمض النووي المختلفة بناءً على وزنها الجزيئي
🔴 For the DNA ladder stains
عادة يُستخدم والاكثر شهرة هو بروميد الإيثيديوم (ethidium bromide) ، والذي يسمح بتصور أجزاء الحمض النووي بعد الرحلان الكهربائي للجل.
⚪️ سلالم الحمض النووي المتاحة على شكل 50 bp و 100 bp و 1000 bp و 3000 bp.
✔️ يتم إنشاء هذه السلالم عن طريق digestion أجزاء الحمض النووي المعروفة الطول من المصادر الطبيعية بواسطة restriction enzymes.
✔️ في الآونة الأخيرة ومع ذلك ، هناك العديد من البروتوكولات المختبرية التي تصف تحضير سلالم الحمض النووي باستخدام طريقة (PCR).
تتضمن هذه الطريقة
إما
- Amplification of a DNA target using primer sets
- أو the separate amplification of different DNA targets using specific primers.
📍يجب أن يتمتع سلم الحمض النووي المستخدم في الرحلان الكهربائي بالخصائص التالية:
✔️يجب أن تكون الأجزاء الموجودة داخل السلم قابلة للفصل عن بعضها البعض.
✔️يجب أن يكون تركيز individual fragments كافيًا لتصور بعد الرحلان الكهربي.
✔️يجب ألا يؤثر السلم الذي يحتوي على loading dye على specificity سلم الحمض النووي.
✔️يجب أن تكون الأجزاء الموجودة في السلم ثابتة بدرجة كافية لاستخدامها لفترة طويلة.
✔️يجب أن يكون السلم عالي النقاء ، وتجنب fragments غير الضرورية وغير المعروفة.
📍بعض الأنواع الشائعة من سلم الحمض النووي
🔺 1kb DNA ladder
يتكون من 13
linear double-stranded DNA fragments
والتي يمكن استخدامها لتحديد حجم
DNA fragments with 250 bp to 10,000 bp.
🧬يساعد استخدام هذا السلم في تحديد نتائج الرحلان الكهربائي بسرعة وسهولة.
🧬 the recommended load for an electrophoresis run is 0.5 µg (5µl)
🧬 يمكن استخدامها إما في agarose or in polyacrylamide gels بتركيز جل عند 0.75٪ إلى 1٪.
🔴 يمكن تخزين السلالم التي يبلغ حجمها 1 كيلو بايت في درجات حرارة متفاوتة مثل 25 درجة مئوية لمدة ستة أشهر ، وعند 4 درجات مئوية لمدة 12 شهرًا وعند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة 24 شهرًا في تخزين مؤقتة 10mM Tris-HCl
or 1 mM EDTA
🔺1kb plus DNA ladder
🧬 ١ كيلو بايت plus من سلم الحمض النووي يتكون من اجزاء الحمض النووي بطول يتراوح من 0.5 كيلو بايت إلى 10 كيلو بايت المستخدمة
To determination of the size of 🧬double-stranded DNA fragments بطول يتراوح من 250 bp إلى 25000 bp.
🧬 1 كيلو بايت plus من سلم DNA يتكون من 14 جزء من الحمض النووي المنقى chromatography-purified DNA fragments.
🧬 ينتج عن purified DNA fragments
bands حادة وواضحة تساعد في عملية تحديد النتيجة.
🧬 يساعد على تحديد حجم DNA fragment التي تكون أطول بكثير من الأجزاء المعتادة
🔺100bp DNA ladder
🧬 سلم الحمض النووي 100 bp يستخدم في تحجيم وتقدير double-stranded DNA بحجم يتراوح من 100 bp إلى 1500 bp
🧬 يمكن استخدامه أيضًا في أغراض التشخيص مثل الكشف الجزيئي عن مسببات الأمراض characterization of the genetic variability.
🧬 إلى جانب ذلك ، يمكن استخدامه في tagging للجينات المقاومة للأمراض.
🔺100bp plus DNA ladder
🧬 سلم 100 plus من الحمض النووي يستخدم في تحجيم وتقدير الحمض النووي double-stranded DNA في نطاق يتراوح من 100 bp إلى 3000 bp على agarose
or polyacrylamide gels
🧬 يمكن استخدام هذا سلم
لتصور أجزاء الحمض النووي linear double-standard DNA fragments بحجم 100 bp حتى 3000 bp.

جاري تحميل الاقتراحات...