تكنولوجيا تحديد الاختلافات الصغيرة في الجينات (SNP)
فعالية علاج الدواء
قياس التلف الجيني للحمض النووي (DNA)
#ثريد| حديثنا اليوم عن الـReal time PCR (RT-PCR) تعتمد التقنية على نفس طريقة الـPCR والاختلاف هنا هو قدرته على مراقبة التفاعل وقياس حتى أقل كمية من PCR product (DNA, cDNA or RNA)
وزيادة ع PCR بخطوة الreverse transcription.
وزيادة ع PCR بخطوة الreverse transcription.
في كل دورة تضخيم للـPCR يعمل detection of the fluorescence produced by a reporter molecule
ويتميز بدورة إضافية (reverse transcription) نقدر ننتج فيها DNA من الـRNA بسبب كون الـDNA أكثر استقرار.
ويتميز بدورة إضافية (reverse transcription) نقدر ننتج فيها DNA من الـRNA بسبب كون الـDNA أكثر استقرار.
في ايش ممكن نستخدم الReal time PCR🤔
-Quantitative mRNA expression studies.
-DNA copy number measurements in genomic or viral DNAs.
-SNP genotyping.
-Verification of microarray results.
-Drug therapy efficacy.
-DNA damage measurement.
-Quantitative mRNA expression studies.
-DNA copy number measurements in genomic or viral DNAs.
-SNP genotyping.
-Verification of microarray results.
-Drug therapy efficacy.
-DNA damage measurement.
من ناحية الAdvantages نلخصه في نقاط:
1️⃣- Ability to monitor the progress of the PCR reaction as it occurs in real-time
2️⃣- Ability to precisely measure the amount of amplicon at each cycle, which allows highly accurate quantification of the amount of starting material in samples
1️⃣- Ability to monitor the progress of the PCR reaction as it occurs in real-time
2️⃣- Ability to precisely measure the amount of amplicon at each cycle, which allows highly accurate quantification of the amount of starting material in samples
3️⃣-Amplification and detection occur in a single tube, eliminating post-PCR manipulations.
وعشان نبدأ نشتغل على عيناتنا نحتاج نجهز:
-DNA polymerase (Taq polymerase)
-dNTPs
-Magnesium ions
-Sample
-Primers
-Detectors
-Buffer
-Real-time PCR instrument (thermocycler with spectrofluorometer)
وبكذا نكون جاهزين نشتغل خطوات العملي في تغريدات قادمة 👏🏼👏🏼🥼🥼
-DNA polymerase (Taq polymerase)
-dNTPs
-Magnesium ions
-Sample
-Primers
-Detectors
-Buffer
-Real-time PCR instrument (thermocycler with spectrofluorometer)
وبكذا نكون جاهزين نشتغل خطوات العملي في تغريدات قادمة 👏🏼👏🏼🥼🥼
بعد ما جهزنا العينة والكت نبدأ بخطواتنا العملية:
اول خطوة هي مثل الPCR
Amplification:
-Denaturation
-Annealing
-Extension
اول خطوة هي مثل الPCR
Amplification:
-Denaturation
-Annealing
-Extension
Detectionاما بالنسبة لل
عندنا نوعين :
–Non-specific Detection (fluorescent dye): SYBR® Green dye
–Specific detection (detective probe): TaqMan® probe
عندنا نوعين :
–Non-specific Detection (fluorescent dye): SYBR® Green dye
–Specific detection (detective probe): TaqMan® probe
الفرق بين النوعين:
SYBR Green
-غير متخصص فيرتبط بأي minor groove (dsDNA)
وينبعث ضوء مجرد م يرتبط بالدبل ستراند DNA
-more dsDNA=more binding=more fluorescence
ونقدر نستخدمه في حساب كمية الDNA الموجود في التفاعل.
SYBR Green
-غير متخصص فيرتبط بأي minor groove (dsDNA)
وينبعث ضوء مجرد م يرتبط بالدبل ستراند DNA
-more dsDNA=more binding=more fluorescence
ونقدر نستخدمه في حساب كمية الDNA الموجود في التفاعل.
TaqMan
وجود الQuencher بجانب Reporter dye راح يمنعه من انبعاث ضوء، مجرد م يحصل الprobe hybridization ويشتغل الpolymerase راح يعمل cleavage of probe and fluorescence from the reporter dye بينتج عندنا 👌
وجود الQuencher بجانب Reporter dye راح يمنعه من انبعاث ضوء، مجرد م يحصل الprobe hybridization ويشتغل الpolymerase راح يعمل cleavage of probe and fluorescence from the reporter dye بينتج عندنا 👌
Revers transcription
ننتج فيها DNA from RNA والناتج بيكون complementary DNA (cDNA) ونقدر نستخدمه كtemplate for the PCR
ننتج فيها DNA from RNA والناتج بيكون complementary DNA (cDNA) ونقدر نستخدمه كtemplate for the PCR
جاري تحميل الاقتراحات...