رتبها

بسمه نستعين ونتكلم عن موضوع حفظ الخلايا في وحدة زراعة الخلايا بالتجميد. البروتوكول ممكن يختلف في بعض التفاصيل الدقيقة من مركز إلى آخر ولكن النتيجة الأخيرة نفسها. هذا البروتوكول خاص لي انا فأرجوا إحترام حقوق النشر 😁
*الرجاء إتباع كامل خطوات السلامة قبل البدء في العمل

ما الفائدة من حفظ الخلايا؟
تجمد الخلايا لغرض حفظها لوقت الحاجة كمخزون إحتياطي للمستقبل تماما مثلما يعملوا مع الذهب والنفط او بسبب التوقف عن العمل عليها لأي ظرف.
تبقى الخلايا محفوظة و سليمة بإذن الله لعدة سنوات او عدة شهور بحسب طريقة التخزين.
وهنا نستعرض طريقتين للحفظ

في الواقع هنالك ثلاث طرق لحفظ الخلايا ولكن سوف نتكلم عن اهم طريقتين بالتفصيل في هذا الثريد.
يمكن حفظ الخلايا إما في مجمد النيتروجين السائل عند سالب(200 - 180) درجة مئوية او في الفريزر عند سالب (70-80) درجة مئوية وباختلاف درجة الحرارة تختلف مدة الحفظ

عند حفظ الخلايا في liquid nitrogen تبقى لعدة سنوات دون الحاجة إلى تنشيطها بينما نحتاج إلى تنشيط الخلايا وإنعاشها كل ثلاثة أشهر على الاقل عند حفظها في الفريزر.
يتم تنشيط الخلايا عن طريق تبديل الوسط الغذائي لها Media and serum
*يفضل دائما حفظ الخلايا في liquid nitrogen

Protocol
تؤخذ flask المزروع فيها مسبقا وتسكب بيئتها في وعاء طرح glass beaker للتخلص منها.
تنزع الخلايا من سطح flask بواسطة أنزيم التريبسن والذي يفضل إضافة EDTA عند تركيز نهائي بنسبة 0.1% لقدرة هذا المركب على الاتحاد مع أيونات الكالسيوم الموجود بالمادة البروتينية اللاصقة للخلايا

يتم فصل Trypsin عن الخلايا بواسطة جهاز الطرد المركزي Centrifuge او الغسيل wash
بعد فصل Trypsin عن الخلايا تصبح الخلايا نقية وتوضع في أوعية حفظ
نضيف إليها البيئة بمقدار 8مل
نضيف المصل serum بمقدار 1مل
نضيف بعد ذلك 1مل من مادة الجلسرين المعقم Gelycerine او Dimethylsulphoxide

تسجل بيانات الخلايا وتاريخ الحفظ واسم الشخص الحافظ لها على قنينة الحفظ وعلى الغطاء ايضا.
تغلف القنينة بشريط مطاطي مخصص parafilm بداية من الغطاء وهي في وضع عمودي

تغلف القنينة جيدا كاملة بواسطة parafilm
تغلف بالمنديل المعقم أيضا لتفادي الانخفاض السريع في درجة البرودة عند الخلايا مما قد يؤثر سلبا عليها.
تسجل البينات على المنديل من جديد ومن ثم تغلف تغليف أخير بواسطة parafilm لحفظ المنديل من الماء.

توضع القنينات في الفريزر عند سالب (70-80) درجة مئوية
عند الرغبة في حفظ الخلايا في liquid nitrogen يتم نقل القنينات من الفريزر إلى النيتروجين السائل بعد مرور (6-24) ساعه

النيتروجينLiquid nitrogen المستخدم في تخزين الخلايا خطير ومختلف عن المستخدم في بعض المشروبات او الايسكريمات لذا يجب دائما لبس قفازات سميكة مخصصة و واقي للوجه والعين.
ولكن انصح الجميع بتجربة النيتروجين المخصص للأكل والشرب وخاصة مع الايسكريم للحصول على تجربة التنين 😂😂

وفي الاخير اتمنى الفائدة والتوفيق للجميع والله ولي التوفيق.
اتحفونا بتجاربكم مع النيتروجين في الأكل و الشرب لانه شي ممتع.
وأتنمى للجميع إجازة سعيدة وممتعة وعيد مبارك 🌷🌷
@GeneticsRanda
@AfrahBawazeer
@Biology1802 @Raghad_Qu @kokofaris_ @ghayda_basfar @Nooraloyoun @AlFaisalA77

التصنيفات

المزيد من هذا الكاتب

مواضيع ذات صلة

الأكثر اعجابا

التصنيفات

المزيد من هذا الكاتب

مواضيع ذات صلة

الأكثر اعجابا

نسخ سلسلة