TRIzol Reagentهو أحد الكواشف الجاهزه التي تُستخدم لعزل RNA
من الخلايا والأنسجة. حيث يعمل من خلال الحفاظ على سلامة الحمض
أثناء تجانسه مع الأنسجة ، و في نفس الوقت يكسر الخلايا ومكونات الخلية.
هنا راح أذكر بعض النقاط التي تساعد في نجاح عزل RNA باذن الله ✨
من الخلايا والأنسجة. حيث يعمل من خلال الحفاظ على سلامة الحمض
أثناء تجانسه مع الأنسجة ، و في نفس الوقت يكسر الخلايا ومكونات الخلية.
هنا راح أذكر بعض النقاط التي تساعد في نجاح عزل RNA باذن الله ✨
🔺بداية TRIzolهو المفضل عندي في إستخدامة على صعيد شخصي لعزل RNA، خطوات TRIZOL RNA Isolation Protocol سهل الحصول عليها في كثير من المواقع والاوراق العلمية، لذلك هنا فقط راح اذكر النقاط التي تلعب دور في نجاح العزل من غير ذكر تفاصيل Protocol👌🏻
1️⃣ لابد من التأكد من الكمية الصحيحة المضافة من TRIzol على سبيل المثال:
🔺يُفضل إضافة 1ml من TRIzol لكل OD=1 للبئية البكتيرية
🔺يُفضل إضافة 1ml من TRIzol لكل OD=1 للبئية البكتيرية
2️⃣ التأكد من Completely lyse the sample
3️⃣ عن فصل RNA الجزء العلوي يجب الحرص من عدم اخذ اي جزء من الاجزاء الاخرى
4️⃣عند إضافة chloroform يُفضل إضافة 200 μl لكل 1ml من العينة المفصولة
5️⃣إذا ظهرت نتيجة الجل
rRNA bands smeared
يُفضل إضافة beta-mercaptoethanol بحيث يساعد على ثبات العينة أثناء العزل
10µl of 14.3 M BME per 1ml of lysis buffer
rRNA bands smeared
يُفضل إضافة beta-mercaptoethanol بحيث يساعد على ثبات العينة أثناء العزل
10µl of 14.3 M BME per 1ml of lysis buffer
6️⃣ يجب التأكد من إزالة كامل ethanol بعد عملية الغسل
7️⃣ الحرص على درجة الحرارة الباردة اثناء أداء هذه العملية
8️⃣التأكد من العزل بعمل gel electrophoresis وقراءة للتركيز
9️⃣ ماننسى بحفظ العينة في -80 أو liquid nitrogen
7️⃣ الحرص على درجة الحرارة الباردة اثناء أداء هذه العملية
8️⃣التأكد من العزل بعمل gel electrophoresis وقراءة للتركيز
9️⃣ ماننسى بحفظ العينة في -80 أو liquid nitrogen
جاري تحميل الاقتراحات...