موضوعنا عن طريقة زراعه خلايا ابتدائية من كلى ونبدأ بسمه تعالى.
اهم خطوة دائما و أبدا وهي التعقيم وتجهيز كل الأدوات للعمل قبل البدء في العمل ولبس جميع متطلبات السلامة و الوقاية و يفضل وضع خطة مسبقة بجميع خطوات العمل حتى ولو كنت متمرس.
اهم خطوة دائما و أبدا وهي التعقيم وتجهيز كل الأدوات للعمل قبل البدء في العمل ولبس جميع متطلبات السلامة و الوقاية و يفضل وضع خطة مسبقة بجميع خطوات العمل حتى ولو كنت متمرس.
دائما احب اركز على التعقيم حتى نتأكد من سلامة العمل. اول شيئ طريقة جلب العينة يجب أن تكون معقمة بحيث توضع في كيس معقم في حافظة مبردة ويجب عدم إزالة طبقة الدهون منها او الغلاف الشفاف الخارجي المحيط بالكلى. عدم غسل الكلى بالماء وتجنب لمسها باليد. عدم التأخير في جلب العينة
تعقيم الأدوات المراد استخدامها في 250 درجه مئوية لمدة نصف ساعه قبل البدء وتركها تبرد في درجة حرارة الغرفة حتى لا تتسبب في موت الخلايا. وضع التريبسن و البيئة و السيرم ويفضل وجود مضاد حيوي في الحضانه على درجه حرارة 37 مئوية. تجهيز البيكر مع الفلتر والتأكد من جاهزيتهم.
تنقل العينه من الكيس المعقم إلى صحن بيتري معقم باستخدام الملقط و المقص في داخل كابينة العمل ويتم إزالة طبقة الدهون منها و الغلاف الخارجي الشفاف بحذر شديد. يفضل إزالة كل طبقة بأدوات مختلفه معقمه. بعد ذلك نقطع أجزاء صغيرة من سطح الكلى تتراوح حجمها من 5-10 cm وعددها حسب المطلوب
تقطع الأجزاء المقطوع إلى أجزاء أصغر في صحن بيتري جديد لتسهيل عملية تفكيك الأنسجة و استئصال الخلايا بشكل سليم ومن ثم تنقل إلى علبة زجاجية مع spinner وتوضع فوق magnetic stir بعد إضافه البيئة مع المضاد الحيوي للعينة للتخلص من اي تلوث محتمل ومن الخلايا الميتة نتيجة التقطيع
توضع لفترة بسيطة تحدد حسب خبرة التعامل مع الخلايا من قبل ومن بعدها يتم رج الزجاجة برفق. يتم غسل العينة من أربع إلى سبع مرات بنفس الطريقة وفي كل مرة يستخدم بيئة جديدة مع مضاد حيوي ولكن يفضل تخفيف المضاد في كل غسلة. يعاد غسل العينة مرتين بالتربسين لتفكيك الأنسجة و استئصال الخلايا
بكل سهولة و بساطة الان أصبح لدينا خلايا جميلة وشبه جاهزة للنمو ولكن تنقصنا الخطوة الأخيرة وهي تحصيل الخلايا. يوضع سيرم في بيكر مغطى جيدا بفلتر و يتم سكب الخلايا مع التريبسن من بعد الغسل في البيكر من خلال الفلتر. كل غسلة مع تريبسن تجمع مع السيرم في البيكر و تعتبر تجميعه للخلايا.
يفضل تحصيل اكبر عدد ممكن من التجميعات لانه كلما تقدمت مراحل التجميعات كلما كان شكل الخلايا افضل. ويفضل أن لا يقل عدد التجميعات عن سبع تجميعات. هنا لا يجب الخوف على الخلايا من إنزيم التريبسن لان السيرم يوقف عمل التريبسن. يتم نقل كل تجميعه في أنبوبة 50ml بعد إزالة الفلتر من البيكر
يتم نقل كل التجميعات إلى جهاز الطرد المركزي Centrifuge مبرد لتجميع الخلايا في أسفل الانبوبة عند 1500 دورة لكل دقيقة في درجة حرارة منخفضة لمدة خمس دقائق. يفضل درجه حرارة منخفضة في حدود 15-5 درجة مئوية لضمان عدم تكسر الخلايا. بعدها يتم التخلص من السائل وحفض الخلايا في أسفل الانبوبة
يضاف في كل أنبوبة بيئة جديدة مع سيرم بنسبة 10% ويتم رج الانبوبة بهدوء لتنتشر في البيئة. وفي الاخير يتم عد الخلايا و وضع كل 100 الف خلية في واحد مل من البيئة المحضرة مسبقا مع السيرم ونقلها في flask للنمو. يجب التأكد من خلو العينات من اي تلوث ونقلها إلى الحضانة لتركها تنمو بسلام
يتم زراعه اغلب الخلايا الابتدائية بهذه الطريقة و جعل منها cell line. الشكر لله الذي رزقني نعمه العمل في هذا المجال الواسع و الجميل و الشكر لكل شخص ساهم في نشر العلم و المعرفه. اتقبل اي تصحيح او استفسار بصدر رحب واتمنى الفائدة للجميع
جاري تحميل الاقتراحات...