استكمالا لثريد #فلوسايتوميتري
حتى نفهم كيفية عمل اختبارات التدفق الخلوي.. يجب علينا ان نفهم :
- كيفية اختيار الاجسام المضادة لنفهم تركيب الخلية 🧬
- كيفية اختيار الفلوروكروم 🧪
#مختبرات #مختبرات_طبية
حتى نفهم كيفية عمل اختبارات التدفق الخلوي.. يجب علينا ان نفهم :
- كيفية اختيار الاجسام المضادة لنفهم تركيب الخلية 🧬
- كيفية اختيار الفلوروكروم 🧪
#مختبرات #مختبرات_طبية
تسمح الأجسام المضادة باكتشاف مستضد معين ، مما يجعلها مفيدة لوصف البروتينات على سطح الخلايا الحية.
يمكن تمييز هذه الأجسام المضادة مباشرة بعلامة الفلورسنت أو يمكن تصورها عن طريق الارتباط بجسم مضاد ثانوي يحمل علامة الفلورسنت.
يمكن تمييز هذه الأجسام المضادة مباشرة بعلامة الفلورسنت أو يمكن تصورها عن طريق الارتباط بجسم مضاد ثانوي يحمل علامة الفلورسنت.
يسمح هذا لقياس التدفق الخلوي بفرز الخلايا بناءً على أكثر من لون واحد ، يمثل كل منها مولدًا مضادًا مختلفًا مرتبطًا بجسم مضاد مختلف.
كيفية اختيار الجسم المضاد المناسب :
-يجب ان نعرف مواصفات الخلايا المراد دراستها و نوعها و عددها
- معرفة نوع الجسم المضاد و نوع الفلوروكروم المرتبط به
-يجب ان نعرف مواصفات الخلايا المراد دراستها و نوعها و عددها
- معرفة نوع الجسم المضاد و نوع الفلوروكروم المرتبط به
قبل البدء بتصميم multicolor flow panel ،يجب ان
🛑نعرف نوع الجهاز :
١- عدد ونوع الليزر
٢- عدد أجهزة الكشف
٣-نوع الفلاتر المتوفرة في مقياس التدفق الخلوي.
ستحدد هذه المكونات القيود التي يمكن استخدامها على الفلوركروم.
🛑نعرف نوع الجهاز :
١- عدد ونوع الليزر
٢- عدد أجهزة الكشف
٣-نوع الفلاتر المتوفرة في مقياس التدفق الخلوي.
ستحدد هذه المكونات القيود التي يمكن استخدامها على الفلوركروم.
يجب مطابقة الطول الموجي للإثارة للفلوركرومز مع أشعة الليزر المتاحة.
ايضا مطابقة الطول الموجي للانبعاث لفلوركرومز بالفلاتر المتاحة والأطوال الموجية التي تسمح بمرورها.
ايضا مطابقة الطول الموجي للانبعاث لفلوركرومز بالفلاتر المتاحة والأطوال الموجية التي تسمح بمرورها.
🛑يجب معرفة تعداد الخلايا و الجسم المضاد وفلوركرومز:
احيانا تجمع الخلايا يكون نادرا
rare cell populations
أو كثافة الجسم المضاد تكون منخفضة
low antigen expression
بسبب الاختلافات الوظيفية ومستوى نشاط الخلية.
كقاعدة عامة ،
نستخدم ألمع الألوان الفلورية Bright flurochrome
(PE)
احيانا تجمع الخلايا يكون نادرا
rare cell populations
أو كثافة الجسم المضاد تكون منخفضة
low antigen expression
بسبب الاختلافات الوظيفية ومستوى نشاط الخلية.
كقاعدة عامة ،
نستخدم ألمع الألوان الفلورية Bright flurochrome
(PE)
عند وجود العكس نقوم باستخدام فلوركرومات باهتة ، مثل PerCP.
من المهم ملاحظة أن سطوع الفلوركروم يمكن أن يختلف أيضًا بسبب عوامل متعددة مثل المخازن المؤقتة المستخدمة ونوع قياس التدفق الخلوي المستخدم.
من المهم ملاحظة أن سطوع الفلوركروم يمكن أن يختلف أيضًا بسبب عوامل متعددة مثل المخازن المؤقتة المستخدمة ونوع قياس التدفق الخلوي المستخدم.
🛑 التداخل الطيفي:
يمكن أن يكون اختيار الفلوركروم ذو التداخل الطيفي القليل يتعارض عند محاولة تحديد اللون الأكثر سطوعًا. ومع ذلك ، يجدر التضحية ببعض السطوع في كاشف واحد لتجنب الانتشار spillover .
من خلال ضمان وجود الحد الأدنى من التداخل ، فإنه سيقلل من مقدار compensation.
يمكن أن يكون اختيار الفلوركروم ذو التداخل الطيفي القليل يتعارض عند محاولة تحديد اللون الأكثر سطوعًا. ومع ذلك ، يجدر التضحية ببعض السطوع في كاشف واحد لتجنب الانتشار spillover .
من خلال ضمان وجود الحد الأدنى من التداخل ، فإنه سيقلل من مقدار compensation.
🛑 كونترول
يجب ادخال الكونترول في هذه الحالات:
-خلايا غير مضاف لها جسم مضاد لتمييز الحجم وكثافة الخلايا
-تمييز الخلايا الحية عن الميتة
-خلية واحدة مضاف لها جسم مضاد لعمل ضبط الجهاز
- فلوروكروم ناقص لتمييز الخلية المراد دراستها
يجب ادخال الكونترول في هذه الحالات:
-خلايا غير مضاف لها جسم مضاد لتمييز الحجم وكثافة الخلايا
-تمييز الخلايا الحية عن الميتة
-خلية واحدة مضاف لها جسم مضاد لعمل ضبط الجهاز
- فلوروكروم ناقص لتمييز الخلية المراد دراستها
🛑 تركيز الجسم المضاد:
يمكن أن تؤدي التركيزات غير المثلى للجسم المضاد إلى زيادة الارتباط غير النوعي أو تقليل حساسية القياس.
لذلك ، يجب معايرة جميع الأجسام المضادة لتحديد أفضل نسبة إشارة إلى ضوضاء.
Signal to noise ratio
يمكن أن تؤدي التركيزات غير المثلى للجسم المضاد إلى زيادة الارتباط غير النوعي أو تقليل حساسية القياس.
لذلك ، يجب معايرة جميع الأجسام المضادة لتحديد أفضل نسبة إشارة إلى ضوضاء.
Signal to noise ratio
باتباع هذه الخطوات الخمس المهمة ، ستتمكن باذن الله من تصميم وتشغيل تجارب قياس التدفق الخلوي المعقدة متعددة الألوان.
طبعا اي اختبار يجب ان يمر بمرحلة validation
باذن الله نتكلم عنه في يوم اخر.
#مختبرات_طبيه #مختبرات #فلوسايتوميتري #التدفق_الخلوي
طبعا اي اختبار يجب ان يمر بمرحلة validation
باذن الله نتكلم عنه في يوم اخر.
#مختبرات_طبيه #مختبرات #فلوسايتوميتري #التدفق_الخلوي
جاري تحميل الاقتراحات...