من المشاكل التي تحدث في PCR مع افتراض شغلك صح من تجهيز العينة الى مرحلة gel، عدم ظهور الباند او ظهوره بشكل مشوه، ومن الحلول عمل مايسمى Gradient PCR to Determine the Optimum Annealing Temperatureاي بمعنى تدرج بدرجة الحرارة من الاصغر الى الاكبر لوصول للدرجة المناسبة annealing (١)
اللي هي بيظهر من خلالها الباند بشكل واضح ، وغالبا يتم استخدام هالطريقة اذا عندنا بادئ primer جديد مصممينه، فيتم جعل جهاز PCR يتدرج في درجات الحرارة بشكل تدريجي مثال الصورة
نلاحظ كيف تدرج بدرجة الحرارة من ٥٧ الى ٦١ وان الدرجة المناسبة هنا بتكون هي ٦٠درجة مئوية (٢)
نلاحظ كيف تدرج بدرجة الحرارة من ٥٧ الى ٦١ وان الدرجة المناسبة هنا بتكون هي ٦٠درجة مئوية (٢)
نلاحظ اكثر من هالدرجة الباند اختفى من الجل واقل من ذلك الباند صاير كثيف شكله ، فالافضل يكون ٦٠ درجة مئوية (٣)
جاري تحميل الاقتراحات...