2️⃣ الاهمية الحيوية للأحماض النووية
تمثل الاحماض النووية البنك المركزى الخلوى الذى يحتوى على جميع أسرار الصفات الوراثية وشفرات تكوين البروتين التى يؤدى وجودها الى ظهور الصفات كما يؤدى اختفاءها الى غياب الصفات أوربما ظهور أمراض ..
تمثل الاحماض النووية البنك المركزى الخلوى الذى يحتوى على جميع أسرار الصفات الوراثية وشفرات تكوين البروتين التى يؤدى وجودها الى ظهور الصفات كما يؤدى اختفاءها الى غياب الصفات أوربما ظهور أمراض ..
العوامل التي يجب أخذها في الاعتبار :
3️⃣ أصل العينة: يتم استخدام مجموعات مختلفة لاستخراج المواد من مصادر محددة ، بما في ذلك الأنسجة البشرية ، والدم ، والشعر ، والأنسجة القوارض ، والأنسجة الورقية ، والبكتيريا ، والخميرة ، والفطريات ، والحشرات ، والبراز ،
3️⃣ أصل العينة: يتم استخدام مجموعات مختلفة لاستخراج المواد من مصادر محددة ، بما في ذلك الأنسجة البشرية ، والدم ، والشعر ، والأنسجة القوارض ، والأنسجة الورقية ، والبكتيريا ، والخميرة ، والفطريات ، والحشرات ، والبراز ،
وسوائل الجسم ، والجراثيم ، والتربة ، والعينات السريرية (عينات خزعة ، شفط إبرة دقيقة) ، عينات الطب الشرعي ( بقع الدم المجفف )
4️⃣ طريقة التحضير: يمكن أن تكون مستحضرات التحضير: حبيبات خلايا طازجة أو مجمدة سابقًا ، وأجزاء الأنسجة المضمنة بالبارافين أو الثابتة بالفورمالين ، وأقسام الأنسجة المجمدة ، والخلايا الثابتة بالإيثانول ، وعينات Oragene المحفوظة ، وعينات من مصادر الطب الشرعي التي قد تحتوي على عدد محدد
3️⃣ الاستخدام المقصود : يجب أن تكون جودة ونقاوة الحمض النووي التي توفرها المجموعة مناسبة لتطبيق المصب المقصود . 👇🏻
sequencing, fingerprinting, PCR, quantitative PCR (qPCR), Southern blotting, random amplification of polymorphic DNA (RAPD), amplified fragment length polymorphism (AFLP), and restriction fragment length polymorphism (RFLP) applications, restriction endonuclease digestion.
6️⃣ خطوات الاستخلاص كالاتي : تحليل الانوية (Nucli lyses) للخلايا حقيقية النواة ، العينة التي راح تكون معنا دم🩸من (الام و الابن) الهدف من التجربة تحديد النسب Parentage test طبعن كل عينة ولها protocol محدد نقطه مهمة .
7️⃣ المواد التي نحتاجها بالاستخلاص reagents راح اذكر لكم وظائفها كذلك قبل بدا التجربة عشان تكون بقارب واحد 😅💪🏻 ونعرف function لهذه الكواشف .
🧪 Heparinized blood وظيفته مانع تخثر
🧪 Solution B وظيفته تكسير كريات الدم الحمراء والبيضاء ( تكسير الغلاف النووي )
🧪 Buffer R يساعد كذلك في تحليل الجدار الخلوي للوصوول الى هدفنا الرئيسي 🧬 😍
🧪 Solution B وظيفته تكسير كريات الدم الحمراء والبيضاء ( تكسير الغلاف النووي )
🧪 Buffer R يساعد كذلك في تحليل الجدار الخلوي للوصوول الى هدفنا الرئيسي 🧬 😍
🧪 Proteinase وله من اسمك نصيب تحليل البروتينات مثال هستون Histone وبروتينات اخرى مثل الهيموجلوبين
🧪 Dithiotheritol او مايعرف DTT وظيفته تساعد على تحليل جميع البروتينات آو الشوائب.
🧪 Dithiotheritol او مايعرف DTT وظيفته تساعد على تحليل جميع البروتينات آو الشوائب.
يتم نقل 200 مايكرو من heparinized blood الى العينة ثم نظيف 600 مايكرو كذلك من Solution B ✅ نضعها بالثلج لمدة 5 دقائق after that نضعها بجهاز الطرد المركز centrifuge لمدة 3 دقائق
ثم نظيف cold solution 500 والتحريك البسيط لجميع العينات invert them several time نضعها بالثلج لمدة 5 دقايق incubate them بعد 5 دقائق يتم عمل centrifuges مرة اخرى لمدة 3 دقايق والهدف من ذلك فصل الجزئيات ثم نرا بوضوح pellet بالاسفل DNA 🧬
يتم عمل Master Mix بأنبوب خارجي بوجود 125 Buffer R ثم نظيف كذلك 20 Proteinase K ثم اخيرا اضافة 1.5 Dithiotheritol يتم جمع tube ثم التحريك البسيط وهو مزج لجميع المكونات مع بعض ويتم اخذ 146 واضافتها على DNA الموجود عندي ويتم التحريك بسيط عن طريق pipetting
اضافة Preparation على ال DNA 🧬
Transfer DNA to new tubes
Almost Done 😍 trying to transfer DNA 🧬 to filter columan with collection tubes
اللي يسالون عن شكل pellet 🧬 تختلف على حسب العينة لكن الشكل الدايم يكون 👇🏻
وأخيرا وليس آخرا نضعهم في Thermo-shaker لمدة نصف ساعة ، ثم الانتقال الى فحص تراكيز DNA وهي خطوه مهمة concentrations نقف هنا وباذن الله اوفيكم هم التركيز وطريقة عملها 😅🙏🏻👏🏻
جاري تحميل الاقتراحات...