سنتحدث ونشرح اليوم بشكل مبسط خطوات تحضير أطباق الزراعة للخلايا الجذعية، ثم زراعة الخلايا فوق الخلايا الداعمة، ثم فصل الخلايا الجذعية وتخزينها الى وقت الحاجة اليها.
سنجعل أسرار المختبرات سهلة ومفهومة للجميع، لكل من يرغب كشف مايدور في المختبر بلغه سهلة وممتعه باذن الله.
سنجعل أسرار المختبرات سهلة ومفهومة للجميع، لكل من يرغب كشف مايدور في المختبر بلغه سهلة وممتعه باذن الله.
١- تغطية أطباق الزراعة بطبقة من الجيلاتين.
يقوم بدور مساعدة الخلايا على الإلتصاق وبالتالي على فاعلية طرق التحكم بها ، تكاثرها أو إجبارها على التخصص.
هناك نوعين من الجيلاتين
أ-سائل وجاهز للإستخدام ومخفف الى النسبه المطلوبه وهي 0.1% أو أي نسبه أخرى.
ب-بودرة وتحتاج للتخفيف والتحضير
يقوم بدور مساعدة الخلايا على الإلتصاق وبالتالي على فاعلية طرق التحكم بها ، تكاثرها أو إجبارها على التخصص.
هناك نوعين من الجيلاتين
أ-سائل وجاهز للإستخدام ومخفف الى النسبه المطلوبه وهي 0.1% أو أي نسبه أخرى.
ب-بودرة وتحتاج للتخفيف والتحضير
تحضير البودرة
١-يتم وزن الكمية المراده لنسبة التخفيف المطلوبة وإذابتها في الماء المقطر.
٢-إستخدام Autoclave وهو يشبه (قدر الضغط)ذلك لتعقيم الخليط بالحرارة 121•c درجة مؤية لنصف ساعة
٣- بعد التعقيم للجيلاتين في قدر الضغط، يتساوى في هذه المرحلة مع النوع (أ) الذي يكون جاهز من الشركة
١-يتم وزن الكمية المراده لنسبة التخفيف المطلوبة وإذابتها في الماء المقطر.
٢-إستخدام Autoclave وهو يشبه (قدر الضغط)ذلك لتعقيم الخليط بالحرارة 121•c درجة مؤية لنصف ساعة
٣- بعد التعقيم للجيلاتين في قدر الضغط، يتساوى في هذه المرحلة مع النوع (أ) الذي يكون جاهز من الشركة
بعد ذلك يتم صب الجيلاتين في الأطباق، داخل كبينة الزراعة، وهي كبينة ذات ضخ هواء يضخ من الاعلى ويشفط من فتحات تقع تحت سطح العمل، وذلك يساعد على ازالة وتنظيف محيط الزراعه من الغبار والبكتيريا والفيروسات، وانواعها كثيرة وليس هذا مجال ذكر انواعها.
نترك الجيلاتين في طبق الزراعة داخل الكبينة الخاصة بالزراعة لمدة تقارب الساعه، الى ان يلتصق الجيلاتين بسطح الطبق، ثم يتم إزالة المتبقي من الجيلاتين، ويتم ترك الأطباق لتتعقم تحت إضاءة UV الفوق بنفسجية لمدة نصف ساعة، الآن أصبحت جاهزة للزراعة.
الآن جاء دور التدعيم الثاني للخلايا الجذعية، وهي زراعة طبقة من الخلايا الداعمة تسمى Feeder Cells, وظيفتها تدعيم الإلتصاق وتزويد الخلايا التي تزرع فوقها بمواد تفرز في الطبق للمحافظة على عدم الانقسام وتدعيم الإلتصاق والإستمرار في التزايد العددي.
الخلايا الجذعية يجب أن تنمو بعدد محدد داخل الطبق، والعدد يجب أن لا يكون قليل جداً ولا كثير جداً، فالعدد القليل يؤدي الى الموت او ضعف التكاثر، والكثير يؤدي الى الإنقسام قبل أوانه وقبل رغبة الباحثين بذلك، لأنه كما ذكرنا يجب التحكم من الباحثين في الإنقسام ومعرفة ساعة الصفر لبدايته.
ولكن لان الخلايا الداعمة هي خلايا لديها القدرة على التكاثر وإستنزاف الغذاء من الطبق للمحافظة على طبيعتها التي خلقها الله عليها من المكافحة للعيش والتكاثر، يحب علينا وقف ذلك التكاثر والمحافظة عليها حيه و بعدد محدد ومناسب، لتأمين بيئة مناسبة للخلايا الجذعية ملكة الخلايا❤️.
يتم ذلك بإستخدام مادة دوائية كيميائية تسمى (MC)،(Mitomycin C) تقوم هذه المادة بتجميد الإنقسام الخلوي عند الخلايا الداعمة في المرحلة البينية التي تم شرحها في تغريدة سابقة (G1,S,G2), ولكنها تبقى حية تحت الخلايا الجذعية من غير زيادة عدديه لكي لاتنافس الخلايا الجذعية في مصادر الغذاء.
بعد ذلك يتم غسل تلك المادة الدوائية غسيل متكرر لكي لا يبقى منها شيء، لان بقاء اي نسبه منها سيؤثر على الخلايا الجذعية عند الزراعة، ويتم إضافة الخلايا الجذعية بنسبه وعدد معين يتناسب مع مساحة الطبق بشرط ان لا تكون قليله لتموت ولا كثيرة ومتقاربه لتنقسم.
يتم ملاحظة نمو الخلايا الجذعية وتغيير السائل الذي تزرع فيه مرة كل 12-24 ساعة حسب الحاجة لمدة يومين أو ثلاثة ايام حسب سرعة النمو.
قبل التقارب الكبير يتم فصل الخلايا الجذعية عن الخلايا الداعمة وتخزينها في أنابيب صغيرة وفي سائل مخصص يمنع إنفجار الخلايا ويمنع موتها او إنقسامها.
قبل التقارب الكبير يتم فصل الخلايا الجذعية عن الخلايا الداعمة وتخزينها في أنابيب صغيرة وفي سائل مخصص يمنع إنفجار الخلايا ويمنع موتها او إنقسامها.
إختصرت الكثير من التفاصيل التي يعرفها أساتذتي المتخصصين في الزراعة والتحكم والتخزين، وتعمدت الإختصار والشرح العام، وذلك لنشر الثقافة وتعريف المجتمع المثقف بما يدور داخل المختبر من علم وجهد.
وأكرر للجميع أنا لست (طبيب) أنا باحث في علم المختبرات ومتخصص في الخلايا الجذعية.
وأكرر للجميع أنا لست (طبيب) أنا باحث في علم المختبرات ومتخصص في الخلايا الجذعية.
للمتخصصين ولمناقشة اي تفاصيل او مشاكل في الزراعة ارحب بكم في الخاص.
جاري تحميل الاقتراحات...