رتبها

اليوم راح اشرح لكم عن علم جديد وفحص حديث وهو فحص الحمض النووي( النات) 👇
Nucleic acid amplification test=NAAT
Real-Time PCR
بسم الله الرحمن الرحيم
اللهم علمني ماينفعني وانفعني بما علمتني ،،

نبذه مختصره عن فحص النات:
*ماهو النات : هو آخر ما توصل إليه العلم الحديث في تكنولوجيا فصل وتضخيم الحمض النووي عن طريق التاكمان
"TaqMan"

فحص كيفي بتقنيه
Real Time PCR
يعتبر هذا الفحص من الفحوصات الاساسيه في بنوك الدم لفحص المتبرعين وخلوهم من الامراض المعديه ويستخدم لغير المتبرعين ايضا والان هو فحص دقيق لفيروس كورونا المستجد Covd19.

مفهوم هذا الفحص:
بإمكان هذا الفحص الكشف عن الفيروس وهو مازال في فترة الحضانه داخل جسم الانسان, أي ان الانسان عندما يتعرض لاصابه فيروسيه توجد هناك فترة وهي من بداية الاصابه الى ان يقوم الجسم بردة فعل عن طريق الجهاز المناعي وهو انتاج الاجسام المضادة,هنا تجي أهمية فحص النات لانه

الحمض النووي للفيروس في فترة قياسيه قصير
وتسمى هدي الفتره بفترة حضانه الفيروسـ
"window period" or “ incubation period”
So Far So Good🙏

So;
NAT tests are (qualitative) in vitro tests for direct detection of HBV DNA, HIV-1 RNA HIV-2 and HCV RNA in human plasma from donation of whole blood and components for transfusion.

نتكلم عن العينه:
Plasma spereated form WB IN EDTA Tube 6ml
(تفصل العينه في أنبوب اللافيندر 6 مل تحفظ عند درجة 1-8 درجة ) بشرط لاتتجاوز الفترة من وقت فصل العينه من المتبرع الى وقت إنجازها 5 أيام

بعد التأكد من طرق حفظ وسلامة العينات
تسمى هذه المرحله بتجهيز العينه sampling )
ثاني شي عندنا عمليه استخلاص الحمض النووي من داخل الخليه وذلك بطريقة تكسير جدار البروتين المغلف للحمض النووي ونحرر ونعزل الحمض النووي

Extraction DNA: isolation and purification of DNA from sample using a combination of physical and chemical methods

ثالثا ) بعد عميلة استخلاص الحمض النووي وصار خلاص بيور أي نقي من غير أي عوالق او مخلفات الخلايا من بروتين وغيره !!
نجي لاهم مرحله في الفحص وهو فصل وتضخيم الحمض النووي( ريال تايم بي سي أر) بتقنية التاكمان طبعا الفحص هذا يستهدف الحمض النووي من نوع د ن أ
يعني دبل هيلكس ,

هنا نطبق مفهوم ال بي سي ار :
3) PCR (Real Time) using Taqman:
a.reverse transcription of target RNA
b.PCR Amplification
c.Hybridization reaction
d. Detection reaction

هنا بنواجه مشكله بسيطه وهي كيف أقوم بتكثير وعمل نسخ التارقت سيكونس للحمض النووي من نوع ر ن أ وهو عبارة عن شريط وراثي وحيد:
بالضبط نحتاج هذا الانزيم :👇
a) reverse transcriptase
ياسلام عليكم حلوين:

نشرحها ع السريع :
المرحله الأولى :
Denaturation:
Denaturation 94-98C, 20-30 sec
عشان تتم هدي الخطوه نحتاج لثرموسيكلر أي نتحكم في درجة الحرار وهنا راح ترتفع درجة الحرار الى درجة عاليه عشان نغير من طبيعة التارقت سيكونس حق الفايروس والدرجه المثاليه 94 درجة مئويه

المرحلة الثانيه :
Annealing:
Annealing step 50-65 C, 20-40 sec
حتنزل درجة الحراره الى 55درجة مئويه برضه عن طريق الثيرمال سيكلر وهنا يجي دور البريمر الي بيكون مصنع من الشركة بشكل علمي مدروس وهو مثل الطوبه (البلوكه الي بنبني فيها البيت )، ونحتاج هنا نعرف اتجاه البرايمر 👇

First Direction :5 prime to➡️3 prime (forword primer)
Second Direction must be: 3 prime to➡️5 prime(Reverse primer)
(وتسمى المتممه)
Complementary DNA sequences of Single Stranded DNA Templets

المرحلة الثالثه :
Extension:
Extension-Elongation 72C
"Polymerization"
لاطاله , هنا يجي دور انزيم اسمه التاج بوليميريز يحتاج نزيد درجة الحراره الى 72 درجة مئويه وظيفته بيعمل ترتيب لل النيوكليتايدس وبكذا يكمل الشريط ويكون عندنا الان الشريط صار اثنين ومنها الى 4 ومنها الى...

dNTP=deoxynucleotide triphosphates➡️
C, T, G, A

Detection reaction:
اخر مرحلة وهنا نستخدم تقنية التاكمان
ويعتبر افضل من الساير جرين ؟اترك الجواب لكم !
TaqMan Vs SYBR green

التاج مان او التاكمان اجمل تنقيه حديثه لعملية الكابشر للتارقت سيكونس المستهدف للفيروس
Fluorescent reporter ( R )= high energy
TaqMan probe
Quencher (Q)= low energy

عندنا هنا بروب تاكمان في بدايته ماسك ريبورتر وهو يحتوي على طاقه عاليه وهو الي بيمسك مع الفوروورد برايمر هدا هو الي بيشع وبالجهه الأخرى اسمه كوينشر طاقة منخفضه هو الي بيستقبل + فلوريسنس ومجرد مايشع معناته الجين المستهدف تم رصده وبكذا نقول تمت عملية اكتشاف الفيروس والنتيجه 👇

والنتيجه إيجابية
في حالة عدم وجود أي تفاعل معناته النتيجه سلبيه