تكلمه لثريد ليا قبل كم يوم تكلمت فيه عن تقنيه ELISA
وهي تعرف بي
Enzyme linked immune sorbet assay
عشان نعرف نفهمها نفصل التعريف
عباره عن تفاعل انزيم مرتبط بجسم مناعي( الناجين، انتي بدي) والارتباط عباره عن ارتباط سطحي ( مدمص) sorbet
و يكون التفاعل اما مباشر بحيث انو يكون مجهز بجسم مضاد و الهدف هو الجسم المستحث للجهاز المناعي (antigen) او غير مباشر وهو يكون الطقم مجهز بجسم مستحث و نبحث عن الجسم المضاد اللي راح يرتبط بيه
طبعا كمان ينطبق على نفس التقسيم الماضي التنافسية و العير تنافسيه و هي تكون عند الكشف عن كدا هدف متقاربه في التركيب
مربط الفرس عندي مو هنا طبعا راح اتكلم بشكل تحليلي و تفاصيل كيميائيه اكثر
مربط الفرس عندي مو هنا طبعا راح اتكلم بشكل تحليلي و تفاصيل كيميائيه اكثر
كل من يستخدم التقنيه دي يعرف انو بعد ما يضيف العينه و يضيف محلول الارتباط اللي يكون يحتوي على جسم مضاد او مستضاد يعمل عمليه بعد التحضين لمده معينه ( تختلف على حسب طريقه التجربه ) نعمل غسل للمواد الغير مرتبطه و غالبا محلول الغسيل عباره عن ( SDS ١٠% و ايزو بروبانول و ايثانول٧٠%)
طبعا SDS اللي هب SODIUM DODOSYL SULFATE عباره عن مركب هو اللي ينتج رغوه الصابون و مهمتو هي معادله الشحنات على الجدار الخلوي عشان تتحول الدهون الى مركبات ذائبه في الماء. وهذا الهدف من الصابون ابو رغوه ( قبل تحضير محلول الغسيل خضوه وشوفوا الرغوه ?)
المهم نجي عالنقطه التانيه وهي بعد الغسيل بحيث نضيف الطرف اللي يحتوي على الانزيم وغالبا كتات ELISA تستخدم انزيم Hydrogen peroxidase لانز يتفاعل مع مركب ال hydrogen peroxide وهو عباره عن جزيء ماء مضاف له اكسجين بمجرد ان ينحل يترك الاكسجين حر وهو غير مستقر عشان يتفاعل
اكيد كلنا سمعنا عن خطوره المركب دا و كيف سلم ويستخدم للتطهير العميق او ازاله الصبغات ( نفس مركب سحب اللون من الشعر يا بنات مفهوم?) فالاكسجين الحر اللي ينطلق منو يفكك و يتأكسد مع اي رابطه يقابلها و يحلها عشان يستقر وهنا تكون الخطوره
المهم مالكم في الطويله نضيف اللي هو مركب اللوني الكاشف للتفاعل و اغلب الكتات تستخدم مركب
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine or TMB
مع فيتامين سي وهذا المركب الطويل له خاصيه اللون البنفسجي الحلو الجميل اللي بوجود الاكسجين الحر يعطينا لون ازرق فيروزي جمييييييل
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine or TMB
مع فيتامين سي وهذا المركب الطويل له خاصيه اللون البنفسجي الحلو الجميل اللي بوجود الاكسجين الحر يعطينا لون ازرق فيروزي جمييييييل
طبعا كل كتات الاليزا تقول لازم ما تزيد المده عن كذا وبعدها تضيف محلول التوقف stop solution وهو باختصار عباره عن ١ مولار حمض الكبريت ليييييش، قلتلي ليش عشان
حمض الكبيريت شااااتطر انو يحل و يفكك الروابط الكبريتيه و ينهيها و دا طبعا من اهم مكونات الانزيم و الجسم المضاد antibody
حمض الكبيريت شااااتطر انو يحل و يفكك الروابط الكبريتيه و ينهيها و دا طبعا من اهم مكونات الانزيم و الجسم المضاد antibody
كدا بوجود فيتامين سي او احيانا حمض الستريك يتحول لون التفاعل الى اللون الاصفر بدرجاتو وكدا يكون التفاعل جاهز للقرايه والتقييم
خطوه الغسيل قلتلكم محتوياتها ترا محلول الغسيل سهل جدا يتحضر بالمختبر بس انتبهوا من تطاير البوده حقت SDS عشان تعمل حساسيه قويه
بالنسبه لخطوهH2O2 و الانزيم وجود الاكسجين الحر يسهل علينا قرايه النتايج مهما كانت فا بأي محلول فلزي اومحلول ملح فلزي يتأكسدبوجود الاكسجين يعطينا لون مميز
بالنسبه لخطوهH2O2 و الانزيم وجود الاكسجين الحر يسهل علينا قرايه النتايج مهما كانت فا بأي محلول فلزي اومحلول ملح فلزي يتأكسدبوجود الاكسجين يعطينا لون مميز
بس المهم جدا انو نعرف اللون الظاهر عند اي طول موجي يقرأ مثلا محلول املاح الحديد يعطي لون احمر طوبي و املاح النحاس تعطي لون اخضر فيروزي
و طبعا بما ان الأكسجين موجود طبيعي في الجو ضروري نوقف التفاعل في مده لا تزيد عن ٣٠ دقيقه و نقرا النتايج حسب الطول الموجي المخصص للون اللي ظاهر عندنا حسب الكاشف اللي استخدمناه
المهم اعتذر عن الاطاله اتمنى اني فهمتكم كيف سير التفاعل عشان تعرفوا كيف تتصرفوا لو حصل اي طارئ
المهم اعتذر عن الاطاله اتمنى اني فهمتكم كيف سير التفاعل عشان تعرفوا كيف تتصرفوا لو حصل اي طارئ
اللي ما يحب يقرا كثير او اخطائي الاملائيه دوختوا او يحب تفاصيل اكثر يشوف المقطع دا شرحت فيه بالتفصيل
youtu.be
و قريبا ان شاء الله راح انزل مقطع جديد في القناه
youtu.be
و قريبا ان شاء الله راح انزل مقطع جديد في القناه
جاري تحميل الاقتراحات...