تقنية (LAMP)
Loop-mediated Isothermal
AMPlification
الموضوعي اليوم عن تقنية حديثة تتحدي تقنية PCR
الترجمة العربية التقريبية لهذة التقنية (LAMP)التضخم الحلقي متساوي الحرارة
هي تقنية الانبوبة الواحدة اي انبوية اختبار تضاف فيها كل المكونات لمضاعفة الحمض النووي DNA -RNA.
Loop-mediated Isothermal
AMPlification
الموضوعي اليوم عن تقنية حديثة تتحدي تقنية PCR
الترجمة العربية التقريبية لهذة التقنية (LAMP)التضخم الحلقي متساوي الحرارة
هي تقنية الانبوبة الواحدة اي انبوية اختبار تضاف فيها كل المكونات لمضاعفة الحمض النووي DNA -RNA.
في ٢٠٠٠ م فريق عمل ياباني يعملون في شركة Eiken Genome وتحت قيادة العالم Tsugunori notomi توصلوا ونشرو اول بحث عن هذه التقنية وحتى ٢٠١٣م هناك pubmed في قاعدة بياناتها يوجد اكثر من ٨٢٠ مقالة وبحث علمي.
هذه التقنية تستخدم للكشف عن الأمراض المعدية والتي تصيب عادة من قبل الفيروسات والبكتيريا والطفيليات والفطريات وغيرها من المسببات.
استخدمت على نطاق واسع للتعرف والكشف على أنواع واجناس جديدة من الطفيليات.
استخدمت على نطاق واسع للتعرف والكشف على أنواع واجناس جديدة من الطفيليات.
البديل للكشف على الأمراض السارية لتكلفتها المنخفضة بذات في المناطق والبلدان متوسط الدخل.
هذه التقنية أقل حساسية من المثبطات في تقنية PCR وخاصة المثبطات الموجودة في الدم.
هذه التقنية أقل حساسية من المثبطات في تقنية PCR وخاصة المثبطات الموجودة في الدم.
تعتمد هذه التقنية على درجة حرارة ثابتة دورية وغير دورية عكس تقنية PCR درجة حرارتها متسلسلة دورية متتابعة.
تستخدم في التقنية انزيم Bst DNA polymerase مستخرجة من بكتيريا Bacillus stearothermophillus
بدلا عن انزيم Taq DNA polymeras المستخرجة من Thermus aquatics والمستخدمة في PCR.
تستخدم في التقنية انزيم Bst DNA polymerase مستخرجة من بكتيريا Bacillus stearothermophillus
بدلا عن انزيم Taq DNA polymeras المستخرجة من Thermus aquatics والمستخدمة في PCR.
عدد البادئات(primer) لهذه التقنية اربعة بادئات وهي كالآتي:
بادئ داخلي إلى الأمام
Forward Inner Primer (FIP)
بادئ خارجي إلى الأمام
Forward Outer Primer (FOP) ويسمى أيضا F3 Primer
بادئ داخلي إلى اللخلف
Backward Inner Primer (BIP)
بادئ خارجي إلى الخلف
Backward Outer Primer (BOP)
بادئ داخلي إلى الأمام
Forward Inner Primer (FIP)
بادئ خارجي إلى الأمام
Forward Outer Primer (FOP) ويسمى أيضا F3 Primer
بادئ داخلي إلى اللخلف
Backward Inner Primer (BIP)
بادئ خارجي إلى الخلف
Backward Outer Primer (BOP)
حيث تقنية PCR تعتمد على بادئين فقط
داخلي وخارجي
يرتبط البادئات الأربعة على ستة مناطق مخصص من الجين المستهدف في الحمض النووي لبداء عملية التضاعف.
لتضاعف RNA يتم إضافة انزيم Reverse transcriptase (RT-LAMP).
داخلي وخارجي
يرتبط البادئات الأربعة على ستة مناطق مخصص من الجين المستهدف في الحمض النووي لبداء عملية التضاعف.
لتضاعف RNA يتم إضافة انزيم Reverse transcriptase (RT-LAMP).
يمكن استخدام برنامج خاص لتصميم البادئات (Primer Explorer v3-v4)
الدرجة الحرارة المستخدمة في هذه التقنية ٦٠-٦٥ درجة مئوية وهي ثابتة.
الدرجة الحرارة المستخدمة في هذه التقنية ٦٠-٦٥ درجة مئوية وهي ثابتة.
الخطوة الاولى يتم رفع درجة الحرارة ثم ارتباط البادئات في الجين المحدد ثم تكوين حلقة البادئات وانشاء اول خيط من الحمض النووي وانفصال الحمض النووي المفرد الخارج من العملية ليرتبط فيه البادئات وتكوين الخيط المماثل
وهكذا تتم في جميع الخيوط من الحمض النووي الى أن تتضاعف جميع الأحماض النووية حيث من ممكن ان تتضاعف في ٣٠ إلى ٦٠ دقيقة أكثر من مليارنسخة.
يتم التضاعف بطريقتين
الأولى تضاعف غير دوري من خلال تكوين حلقة من نهايات خيط الحمض النووي
الثانية تضاعف الحلقي وذلك بعد تكوين الحلقة وارتباط البادئات.
الأولى تضاعف غير دوري من خلال تكوين حلقة من نهايات خيط الحمض النووي
الثانية تضاعف الحلقي وذلك بعد تكوين الحلقة وارتباط البادئات.
طريقة الكشف عن عملية التضاعف وتتم بثلاث طرق :
١. قياس نسبة العكارة Turbidity يمكن أن ترى بالعين المجردة
2. الفلوريسينس Fluorescence يمكن أن يرى بالعين المجردة
3. جل الفصل الكهربائي Gel-Electrophoresis.
١. قياس نسبة العكارة Turbidity يمكن أن ترى بالعين المجردة
2. الفلوريسينس Fluorescence يمكن أن يرى بالعين المجردة
3. جل الفصل الكهربائي Gel-Electrophoresis.
ملخص تقنية LAMP
تقنية ذو حساسية عالية متخصصة ومحددة لحمض النووي DNA-RNA.
تقنية سهلة جدا وفعالة وغير مكلفة.
تقنية مبكرة في مجال التشخيص الجزيئي ويمكن استخدامة لتشخيص الأمراض المعدية وفحص الاغذية و الفحوصات البيئية وغير ذلك.
تقنية ذو حساسية عالية متخصصة ومحددة لحمض النووي DNA-RNA.
تقنية سهلة جدا وفعالة وغير مكلفة.
تقنية مبكرة في مجال التشخيص الجزيئي ويمكن استخدامة لتشخيص الأمراض المعدية وفحص الاغذية و الفحوصات البيئية وغير ذلك.
هذه التقنية تعد بمستقبل زاهر وواعد في الهندسة الوراثية والتقنية الحيوية.
من أهم الأمراض التي استخدمت فيها التقنية عالميا
السل-الملاريا-فيروس نقص المناعة.
إضافة إلى ذلك منظمة الصحة العالمية استخدمتها مؤخرا للكشف عن الامراض التالية:
من أهم الأمراض التي استخدمت فيها التقنية عالميا
السل-الملاريا-فيروس نقص المناعة.
إضافة إلى ذلك منظمة الصحة العالمية استخدمتها مؤخرا للكشف عن الامراض التالية:
dengue, rabies, buruli ulcer, leprosy, Chagas disease, human African trypanosomiasis, leishmaniasis, cysticercosis, echinococcosis, foodborne trematode infections, lymphatic filariasis, schistosomiasis, soil-transmitted helminthiases, yaws.
لفرق الجوهري بين LAMP وPCR
وهنا الفروقات الأخرى بين التقنيتين
جاري تحميل الاقتراحات...